زراعة العينات لتشخيص الفطريات

في هذا الموضوع سنتكلم إن شاء الله عن جزئين

الجزء الاول

انواع الميديا لزراعة العينة والوقت اللازم لحضن العينة

و درجة الحرارة اللازمة لحضن العينة

الجزء الثاني

طرق فحص المزرعة بعد الحضن

****************

الجزء الأول

أنواع الميديا اللازمة لزراعة الفطريات

بعد أن نكون فحصنا العينة ميكروسكوبيا نحتاج الى زراعة العينة من أجل عزلها

يفضل الانابيب في حالة زراعة الفطريات على الأطياق وذلك لأنها لن تجف مع الوقت الطويل في عملية الحضن

وكذلك لإعطاء فرصة للفطر الموجود فعلا في العينة للنمو والتقليل من التلوث في العينة بفطريات أخرى من الجو

الأطياق لا تستتخدم أبدا إذا توقعنا أن نجد Coccidioides immitisهذا الفطر خطر جدا ويمكن استنشاقه بسهولة

ودائما يجب أخذ احتياطات السلامة عند العمل

**************

Sabouraud dextrose agar SDA

هذا هو الميديا العام للزراعة ال PH=5.6 ولكنه فقير بالمواد الغذائية

هذه الظروف تعمل على منع اي بكتيريا من النمو ولكنها تيمح للملوثات من الفطريات

ولكنها لا تسمح بنمو ال Histoplasma capsulatum وبعض السلالات من ال Nocardia asteroides

المكونات

dextrose 40mg

Neopeptone 10mg

agar 15mg

distilled water 1 liter

التحضير

اخلط جميع المكونات وضعها على النار لتذوب

قسمها في انابيب او اطباق وضعها في التعقيم لمدة 10 دقائق

ضعها بوضع مائل واتركها لتبرد ثم ضعها في الثلاجة

طريقة الزراعة

أولااااااااااا ::ضع الانبوب ليأخذ درجة حرارة الغرفة

ثانيا:::أجزاء من العينة تؤخذ وتزرع في الاجار

ثالثا :::احضنها في الحاضنة لمدة شهر قبل ان تسجل ان النتيجة سلبية

Sabourd dextrose agar with
cycloheximide and chloramphenicol
SDS-C&C

السيكلو هيكسميد والكلورام فينيكول هما مضادان حيويان يمنعان نمو البكتيريا

ومعظم الملوثات من الفطريات وبالتالي يسمحان بنمو الفطريات الممرضة الموجودة بالعينة

يستعمل هذا الميديا لزراعة عينات الجلد الشعر الاظافر التي تنمو بهااو يتوقع وجود ال

Dermatophytesاو الcandida albicans

فهذه الميكروبات لا تمنع هذه المضادات من نموها فبالتالي تنمو عليه

المكونات

dextrose 40mg

neopeptone 10mg

agar 15mg

distilled water 1 liter

cyclohexamide 500mg

acetone 10ml

chloramphenicol 50mg

95% alcohol 10mg

التحضير

اخلط اول اربع مكونات مع بعضهما ثم

اذب السيكلوهسيدين في الاسيتون والكلورام فينكول في الكحول

اضف الاثنين الى الميديا واخلطهما جيداااااااااااااااااااااااا

قسم الميديا في انابيب وضعها في الاوتوكليف لمدة 10 دقائق

ثم بردهاااااااااااااااا وضعها في الثلاجة

العمل

اولااااااااااااا:::اترك الميديا تاخذ درجة حرارة الغرفة

ثانياااااااا:::::::اعمل مسحة داخل الاجار

ثالثااااااا::::: احضن العينة لمدة شهر قبل ان تسجل النتيجة سلبية

Brain heart infusion agar with blood BHIAB

هذا الميديا يحوي مواد غذائية جيدة واضافة الدم اليه تجعله غنيا بها اكثر

في وجود الاوكسجين البكتيريا والفطريات الممرضة والملوثة تنموجيدا عليه جميعها

واهذا فهو الى درجة محدودة غير مجدي بوجود الاوكسجين

لكن قيمته بوجود الاوكسجين تكمن في عزل ال Histoplasma capsulatum و ال Nocardia

من عينات معقمة جيدا وكذلك لتحويل الفطريات الDimorphic من فطر الى خميرة

يحضن الميديا في اجواء عديمة الاوكسجين اذا توقعنا وجود ال Actinomycetes

المكونات

brain heart infusion 37mg

distilled water 1 liter

agar 20mg

sheep blood defibrenated sterile 100mg

التحضير

اخلط جميع المكونات معااااااا الا الدم ضعها في الاوتوكليف لمدة 15 دقيقة

ثم بردها على درجة حرارة 50 مئوية

اثناء التفاف الاناء الموضوع فيه الميديا اضف الدم ثم صبه حالا داخل الاطباق او قسمه اجزاء في الانابيب

يتبع ان شاء الله

عرض ممتاز شكرا

جزاكي الله خير دكتورة شهد

شكرا لمروركم الكريم دكتور/ محمد احمد محمد

ودكتور / احمد يوسف شكرا لكما

*******************

استكمالاً للموضوع فأن هناك نوعاً اخر من الميديا هو

Brain heart infusin media with cyclohexamide, and chloramphencol

BHIAB-C&C

كنا قد قلنا أن BHIAB بوجود الاوكسجين تكمن في عزل ال Histoplasma capsulatum و ال Nocardia

ووجود المضادات الحيوية هنا يمنع نمو البكتيريا او الفطريات الاخرى التي تلوث العينة من الجو

بما فيها ال Nocardia asteriods

************

المكونات

brain heart infusion 37mg

distilled water 1 liter

agar 20mg

sheep blood defibrenated sterile 100mg

cyclohexamide 500mg

acetone 10ml

chloramphenicol 50ml

95%alcohol 10ml

*********************
التحضير

اولا : اخلط المواد الثلاثة الاولى معا واجعلها تغلي

ثانيا: اذب السيكلوهسمايد في الاسيتون والكلورام فينكول في الكحول

ثم اضفهما على الميديا الغالي واخلطهما جيد

ثالثا: ضع الميديا في الاوتوكليف على 15
psi لمدة 15 دقيقة ثم برد على درجة 50 سيلسيوس
اثناء تحريك الاناء ضف الدم وقسم الميديا فورا الى اجزاء في تيوبات سلانت
برد وفرز

************

طريقة العمل

اجعل الميديا يأخذ درجة حرارة الغرفة ادخل سواب الى السلانت
احضن لمدة شهر على درجة 30 سيلسيوس قبل ان تسجل الفحص سلبي

وهكذا نكون قد انهينا انواع الميديا بأذن الله

************************

ولكن قبل ان ننهي الموضوع هناك نقطتين يجب التطرق لهما أولا

وقت الحضن

بعض الفطريات تنمو خلال 3 الى 4 ايام وبعضها يحتاج الى 4 اسابيع

هذه المعدلات في النمو تختلف حسب نوع الميديا ودرجة الحرارة والمثبطات في عينة الشخص

ولكن للتقليل من الخطأ بالنتيجة السلبية احفظ العينة لمدة شهر قبل ان تبلغ عنها انها سلبية

العينات التي تتوقع وجود Histoplasma capsulatum فيها احفظها لمدة ثلاثة اشهر

______________________________

النقطة الاخرى هي

درجة حرارة الحضن

بشكل عام الفطريات تحتاج الى درجة حرارة 30 سيلسيوس

ودرجة حرارة الغرفة ايضا 25سيلسيوس مقبولة ايضا

الحضن على درجة 37 سلسيوس من الممكن ان يمنع نمو بعض الانواع من الفطريات

ولان ال dimorphic fungi تتحول ومن الافضل عزلها كفطر وليس كخميرة

ولكن بالنسبة لل actinomycetes دائما يجب زرعها على درجة حرارة 37 مئوية

****************

وان شاء الله نستكمل طرق فحص الفطريات بعد الزراعة في موضوع اخر وذلك للتفرقة فقط

اشكرك جدا يا دكتوره شهد ........... انا كنت محتاجه الموضوع ده جدا ولقيت فيه اللي انا عايزاه...لان انا شغل الماجستير بتاعي في الفطريات وبحاول اجمع حاجات عن الشغل العملي قبل ماابدا...وياريت الموضوع يكون متجدد ويكون فيه موضوعات جميله زي دي لاني انا عمري ماشتغلت اي شغل عملي بس بحاول اتعلم من المنتدي......

انا بس نفسي تعملي موضوع عن زراعه عينات الsputum وكيفيه عزل فطريات ممرضه منها....شكرا جدااااااااااا

جزاكي الله خيرا دكتورة شهد

رائع وممتاز ونحتاج لصور حتى تعم الفائدة

» الطرق العملية لزراعة الفطريات وعزلها