الطرق العملية لزراعة الفطريات وعزلها

الطرق العملية لزراعة الفطريات وعزلها

قبل ان ابدأ اقول ان هذا الموضوع قد تم اعداده وتحضيره خاصةً

لمنتديات التحاليل الطبية

وهو موضوع مترجم من عدة كتب واماكن على النت

فلا يجوز نقله الى اي منتدى اخر دون التنويه الى حق منتدى التحاليل الطبية فيه

وغير ذلك من جهد المعد له فهو جهد لله واضعه بين يدي كل طالب علم

******************

التشخيص عن طريق الفحص المباشر بالميكروسكوب

من المهم جدا ان كل عينة فطريات تصلنا يجب فحصها عن طريق الميكروسكوب قبل او متزامنا مع الزراعة

وهذا لعدة اسباب

الفحص المباشر يمكنك من اخراج نتيجة سريعة للطبيب لتخبره اذا كان هناك فطر او لا

ومن الممكن ان تخبره عن نوع الGenus الموجود

عن طريق الفحص المباشر ايضا تستطيع ان تختار الميديا المناسبة لزراعة الفطر المتوقع

وكذلك فان الفحص المباشر من الممكن ان يحمي حياة المريض اذا رأينا الفطر فمن الممكن للطبيب ان يبدأ العلاج

فهناك بعض انواع الفطر تحتاج زراعتها الى 3 الى 4 اسابيع للنمو في هذا الوقت من الممكن لبعض الامراض ان يكون المريض قد مات

من الناحية الاخرى اذا لم نرَ فطرا معينا في الفحص الميكروسكوبي يمكن ان يتجنب الطبيب استعمال المضاد له في العلاج

فنتجنب عقارا ساما ويحتاج الى وقت للتخلص من اثاره

وفي هذا الوقت يبدأ الطبيب بالتفكير في باحتمالات اخرى للمرض

وهناك عدة طرق للفحص المباشر نبدأ بشرحها ان شاء الله

***************

Saline wet a mount

من الممكن ان نلاحظ بهذه الطريقة الخميرة والهيفات والهيفات غير الحقيقيةوالابواغ وكثير من الاشياء

اولا ::المواد التي نحتاجها

كلوريد الصوديوم 0.85mg

وماء مقطر 100mg

ولتحضير المحلول نمزج الماء والكلوريد معاااااا

ثانيا :::طريقة العمل

اولا ضع نقطة من العينة على الشريحة وضع فوقها قطرة من المحلول الملحي

ثانيا ضع غطاء زجاجي فوق العينة وافحصها تحت الميكروسكوب تحت العدسة ذات التكبير الصغير ثم الكبير باستعمال القليل من الضوء

ستظهر الاجسام وكأنها مكسرة وتشع وممكن ان نراها خضراء اللون

لكن يجب ان نميز اي خميرة عن فقاعات الهواء او خلايا الدم الحمراء لانها قد تتشابه

LACTOPHENOL COTTON WET A MOUNT

الفينول في الصبغة سوف يقتل اي كائن دقيق بينما اللاكتيك اسيد سوف يحمي تركيبة هذا الكائن

ال cotton blue سوف تصبغ ال الكيتين الموجود في الجدار الخلوي للفطر

نفس ما سنراه في فحص المحلول الملحي ولكن هذه الشرائح من الممكن ان نحتفظ بها لتكون دائمة

اولا :::::::المواد المستخدمة

LPCB:وهذا يباع تجاريا

ومكوناته

فينول مركز

جليسرول

وCOTTON BLUE

وماء مقطر

التحضير

نذب الصبغة في الماء المقطر ثم نضف باقي المكونات

ثانيا:::::: طريقة العمل

اولا ضع نقطة من العينة على الشريحة وضع فوقها نقطة من ال LPCBولكن يجب الانتباه بعض العينات قد تحدث رواسب مع هذه الصبغة

ثانيا اخلطهما جبدا قم ضع غطاء زجاجي وافحص تحت الميكروسكوب

ثالثا لعمل هذه الشريحة دائمة اضف حول الاطراف طلاء اظافر او اي عازل

***************

POTASSIUM HIDROXIDE PREPERATION

في الحالات التي تكون فيها العينة عينة شعر او اظافر يمكن لهذه العينات ان تغطي على الفطر الموجود

البوتاسيوم هيدروكسيد يقوم باذابة الكرياتين الموجود في هذه العينات وبالتالي جعل اي فطر مرئيا يصورة واضحة

اولاااااا::: المواد المستخدمة

10% من هيدروكسيد البوتاسبوم وهذه تباع تجاريا

ومكوناته

بوناسبوم هيدروكسيد

جليسرول

ماء مقطر

اذب البوتاسيوم هيدوروكسيد في الماء واضف الجليسرول

الجليسرول يمنع عمليات تكوين البلورات

ثانيااا ::::::::طريقة العمل

اولا اعمل شريحة رقيقة جدا جدا من العينة وضعها على شريحة زجاجية

ثانيا ضع 10%من البوتاسيوم هبدروكسيد فوقها وضع غطاء زجاجي كذلك ويشكل لطيف جدا حركها فوق اللهب ولكن لا تحرقها

ثالثا بعد ان تبرد العينة وتبدو واضحة افحصها تحت الميكروسكوب للبحث عن الفطر او اي شيئ يتعلق به

GRAM STAIN

عادة اول ما نلاحظ وجود الفطريات في العينة المصبوغة بصبغة الجرام

الفطريات يكون لونها ازرق يعني Gram positive

ونستطيع ايضا رؤية الهيفات والخميرة وكل الاجزاء الاخرى التي نريد

ونستطيع التميز بين البكتيريا الدائرية والخميرة عن بأن الخميرة اكبر في الحجم ويكون لها براعم

في الافرازات المهبلية يمكن الخلط ما بين الخميرة والحيوانات المنوية في الشرائح ذات الصبغة الموجبة

ولكن يجب التفريق بينهما

وكذلك يجب الانتباه في عينات النخاع الشوكي وعينات الجهاز التنفسي فان الكابسول يمنع صباغة الفطر وبالتالي لا يظهر

هذه النقطة مهمة لان الطبيب من الممكن ان لا يطلب فحص انسجة للمريض وبالتالي لن يشخص المرض

الهيفات تكون اعرض ثلاث الى اربع مرات من البكتيريا العصوية والهيفات لا تصبغ من الاطراف كاملة

اما لمعرفة كيفية عمل صبغة الجرام فيمكن العودة الى الموضوع التالي / للدكتورة رشا حمدي

https://clinicalanalysis.yoo7.com/montada-f54/topic-t3569.htm

*************

ACID-FAST STAIN

الفطريات التي تشيه البكتيريا مثل ال Nocardia هذه تكون acid fast positive

وهذه تظهر حمراء اللون وتكون الخلفية زرقاء اللون

ومن الممكن الخلط يينها وبين الmycobacteriaولكن الثانية لديها خيوط متفرعة وشكل دائري ال Nocardia

المكونات

kinyon's carbolfuchin وهذا يياع تجاريا
يتكون من basic fusion
95% ethanol
openol crystals
distilled water

طريقة العمل

اولا::: اعمل شريحة من العينة وكذلك عينتا كونترول احدهما موجبة والاخري سالبة

ثانيا:::ضع صيغة ال kinyon's carbolfusion لمدة 5 دقائق

ثالثا:::اغسل الشريحة

رابعا:: اغسل الشريحة ب 50% ايثانول الى ان تزول البقايا للصبغة تزول

خامسا:::اغسل بماء عادي

سادسا:::ضع مادة مزيلة للون وفي هذه الحالة نستعما ال sulfuric acid لمدة 3 دقائق

سابعا :::اغسل بماء عادي

ثامنا:::ضع صبغة معاكسة في هذه الحالة ال methylene blue لمدة دقيقة واحدة

واخيراااااااااااااااااااااا:::اغسل بماء عادي واترك الشريحة تجف

INDIA INK PREPERATION

هذه الصبغة تستعمل لفحص الكابسول الذي يوجد حول الخميرة وخاصة في حالة ال Creptococcus neoformance

في عينات النخاع الشوكي ولكن يجب الانتباه الى عدة امور

هناك بعض البكتيريا والفطر الاخرى التي لها كابسول ويمكن ان لا تصبغ لان الصبغة ربما لم تخترق الكابسول

فيجب الانتباه الى هذا ولا تبحث عن الكابسول فقط

امر اخر ان هناك بعض البكتيريا التي لها كابسول مثل ال Klebsilla فهذه من الممكن الخلط بينها وبين الخميرة

ولكن البكتيريا حجمها حوالي ربع الخميرة ولا يكون لها تبرعمات

***************

طريقة العمل

اولاااااااااااا:::نضع على شريحة نقطة من محلول الصلغة مع نقطة من العينةونضع فوقها غطاء زجاجي

نتركها 10 دقائق

ثانيا:::::::: نفحص العينة تحت الميكروسكوب

*************

هناك انواعا اخرى من الصبغات لن نتعرض لها لانها قليلا ما تستعمل

وهكذا نكون انهينا الجزء الاول من الحديث عن الفطريات وتشخيصها المباشر بالميكروسكوب

لنبدأ ان شاء الله في الحديث عن زراعة العينات

جزاكي الله خير دكتورة شهد

جزاكى الله الف خيرا

دكتورة شهد

على هذا المجهود الكبير وهذا ليس بجديد على حضرتك

فهذا ما تعودنا عليه دائما من حضرتك

شكرا جدا لمرورك الكريم / دكتور أحمد يوسف

شكرا لك على مرورك وكلماتك الطيبة / دكتورة رشا

جزاكما الله ألف خير

وان شاء الله سنكمل عن طرق زراعة الفطريات في المختبر

شكرا جزيلا لك دكتورة شهد على المعلومات

الحقينا بصور حتى يكون الشرح وافي للجميع

» زراعة العينات لتشخيص الفطريات
» سم العناكب ... اسرع الطرق لعلاج مرضى القلب